粪肠球菌对小鼠LD50的测定

摘 要：本次实验选用健康的体重为18～22g 的SPF级昆明系小白鼠(雌雄各半) 共150只，接种对猪具有致病性的粪肠球菌，分别进行半数致死量测定、临床症状观察。感染小鼠表现出明显的神经症状，小鼠感染粪肠球菌与病猪自然感染症状相似。测定粪肠球菌OD600值与CFU的关系，并根据OD600值与CFU的关系作出曲线，根据OD600值与CFU的关系计算出粪肠球菌对小鼠的LD50为5.75×109。本次实验的结果与羊源粪肠球菌感染小鼠的人工模型的结果基本一致，为进一步探究粪肠球菌在小鼠体内的感染机、制毒力因子及免疫应答奠定了基础。
关键词： 粪肠球菌； 人工感染； 半数致死量

Dung Enterococcus on Mice Determination of the LD50
Abstract：This experiment chooses a healthy weight for 18 ~ 22g SPF Kunming is male mice (150 evenly), inoculation only for the lamb has the dung enterococcus, highly respectively half lethal dose of determination, clinical symptom observation. Infected mice showed obvious neurologic symptoms, the mice infected with a dung enterococcus natural infection symptoms similar. Determination OD600 value and dung enterococcus CFU relationship, and according to the relationship OD600 value with the CFU made, according to OD600 value and curve CFU relationship to calculate the dung enterococcus 5.75 x for the LD50 mice 109. The experimental results and sheep dung enterococcus infected mice source of the artificial model results are basically the same for further inquiry dung enterococcus in mice infected machine, manufacturing force factor and the immune response to lay the foundation.
Key words: Enterococcus faecalis; artificially infected; median lethal dose
 
2 实验材料
2.1 实验动物
小白鼠为体重18～22g 的SPF级昆明系小白鼠(雌雄各半) 共150只, 购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，常规饲养。
2.2实验菌株 
分离鉴定HN45号粪肠球菌分离株，由湖南农业大学动物医学院传染病实验室提供。
2.3主要试剂和材料
胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）为Sigma产品，琼脂粉（日本分装）、十二烷基硫酸钠（SDS）、三羟甲基氨基甲烷（Tris）（Genview分装）均购自北京鼎国生物技术有限责任公司，新生牛血清为杭州四季青生物工程有限公司产品，Taq DNA Polymerasea 、dNTP(2.5mM)、 5000 DNA Marker购自天根生物工程公司，伊红、苏木素及多聚赖氨酸购自北京中杉金桥有限公司，蛋白酶K为Roche产品，其它常规试剂均为国产分析纯级产品。

目   录    6000字
摘要……1
关键词……1
1  前 言    2
2 实验材料    3
2.1 实验动物    3
2.2实验菌株    3
2.3主要试剂和材料    3
2.4主要试剂的配制    3
2.5主要仪器    4
3 主要方法    4
3.1 粪肠球菌OD600与CFU关系的测定    4
3.1.1 菌液的平板计数    4
3.1.2 菌液的OD600值测定    5
3.2 粪肠球菌对小白鼠LD50的测定    6
3.2.1 细菌培养    6
3.2.2预实验    6
3.2.3 正式实验    6
3.2.4 LD50的计算    6
4 实验结果    7
4.1 接种菌液后小鼠的临床表现    7
4.2 LD50的计算结果    7
5 讨论    8
6 结论    8
参考文献    9
致    谢    10